การตรวจวิเคราะห์เชื้อ Bacillus cereus

วัสดุอุปกรณ์

1. ปิเปตต์ขนาด 1 มิลลิลิตร

2. หลอดแก้วพร้อมฝาปิด

3. จานเพาะเชื้อ

4. ลูกยางใช้กับปิเปตต์สำหรับดูดน้ำตัวอย่าง

5.ตะเกียงแอลกอฮอลล์

6. ช้อนหรือภาชนะตักอาหารที่ปราศจากเชื้อ

7.ที่วางหลอดทดลอง

8. ขวดเก็บตัวอย่างขนาด 250 มิลลิลิตร

9. ปากคีบ

10. สไลด์

อาหารเลี้ยงเชื้อ

1. Phosphate buffer solution (PBS) หรือ Peptone water

2. Mennitol-egg yolk-phenal red polymyxin agar (MYPA)

3. Trypticase soy polymyxin broth (TSB)

4. Blood agar

5. Nutrient agar (NA)

 

วิธีการทดสอบเชื้อ Bacillus cereus

1. ชั่งน้ำตาลทราย 25 กรัม ใส่ถุงพลาสติกที่ปราศจากเชื้อ ตีให้เป็นเนื้อเดียวกัน ใส่ลงใน phosphate buffer solution (PSB)
เขย่าให้เป็นเนื้อเดียวกัน ได้สารละลายเจือจาง 10^-1

phosphate buffer solution (PBS) 225 มิลลิลิตร + น้ำตาลทราย 25 กรัม

2. ปิเปตต์ดูดสารเจือจาง 10^-1 มา 1 มิลลิลิตร ใส่ในหลอดทดลองที่มี PBS ปริมาตร 9 มิลลิลิตร ได้ความเจือจาง 10^-2
บ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

3. ดูดสารละลาย 10^-1 และ 10^-2 (ทำ 2 ซ้ำ) แต่ละความเจือจาง ปริมาตร 1 มิลลิลิตร ใส่ในหลอด Trypticase soy polymyxin
broth (TSB) ปริมาตร 9 มิลลิลิตร บ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

4. ดูดสารละลาย 10^-1 และ 10^-2 (ทำ 2 ซ้ำ) ของแต่ละความเจือจาง ปริมาตร 0.1 มิลลิลิตร ใส่ลงในจานอาหาร
Mennitol-egg yolk-phenal red polymyxin agar (MYPA) จากนั้นทำการ spread plate ให้ทั่วจาน บ่มที่อุณหภูมิ 35
องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

5. เลือกโคโลนีที่มีสีชมพู อาหารเลี้ยงเชื้อรอบโคโลนีจะมีลักษณะทึบแสง หรือรอบโคโลนีสีชมพูล้อมรอบด้วยบริเวณขุ่นขาว
จานละไม่น้อยกว่าสองโคโลนี

6. นำเชื้อที่สงสัยมา spot บนอาหาร blood agar แล้วบ่มที่อุณหภูมิ 30-32 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง
สังเกตการเกิดปฏิกิริยา Haemolysis

7. หากพบการสลายเม็ดเลือดแบบ β-haemolysis ให้ zone ขนาด 2-4 มิลลิเมตร แสดงว่าเป็นเชื้อ B. cereus ส่วน
Thuringiensis ย่อยสลายเม็ดเลือดแดงได้เล็กน้อย บริเวณผิวหน้าอาหาร แต่สามารถย่อยสลายได้สมบูรณ์ บริเวณ
ด้านหน้าโคโลนี